Ее дебютом стала небольшая роль в одном из эпизодов довольно популярного сериала под названием «Полиция Нью-Йорка» (1996). После этого сериалы с Жустиной Мачадо время от времени стали появляться на телевизионных экранах, но основную свою деятельность начинающая актриса направила на большое кино. И это дало свои результаты, поскольку в ближайшие годы появились такие фильмы с Жустиной Мачадо, как «Во всей красе», «Стрекоза», «Пункт назначения 2», «Маленький Беглец», «Крутящий момент», «Кажется, я люблю свою жену», «Педро», «Случайный муж» и «В электрическом тумане».
Однако несмотря на довольно активную карьеру в полном метре, прорывом для Жустины Мачадо все же стал телевизионный проект, когда она начала сниматься в проекте «Клиент всегда мёртв». Именно участие в нем принесло ей не только узнаваемость среди публики, о и признание критиков. Актриса получила награду Гильдии киноактёров США в 2004, впрочем в номинации за лучший кастинг. В этом шоу она продержалась четыре сезона – до 2005 года. Однако этот проект стал для актрисы судьбоносным, с той точки зрения, что после него она была признана коллегами, а это, как следствие, является пропускным билетом к востребованности, так что в карьера стала насыщенной, хотя и не слишком богатой на роли ведущего состава.
И все же в 2016-м, после того, как на протяжении двадцати лет она играла роли второго плана в сериале от Netflix «Однажды за один раз» Жюстина Мачадо получила свою главную роль.